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      蛋白 Pull Down(蛋白和蛋白互作)

      更新時間:2024-08-07

      訪問量:3805

      廠商性質:生產廠家

      生產地址:

      簡要描述:
      Halo Pull Down(蛋白和蛋白互作)技術是將Halo標簽的融合蛋白固相化到磁珠上,與細胞總蛋白進行孵育,鑒定與之相互作用的蛋白。該方法可以鑒定與已知蛋白相互作用的未知蛋白,也可以鑒定兩個已知蛋白間是否存在相互作用。
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      蛋白Pull down技術將目標蛋白進行體外原核表達,使標簽蛋白(Halo、GST、His等)與目標蛋白融合表達,可以不受抗體、物種限制僅借助標簽的親和介質將目標蛋白純化出來,目標蛋白在純化過程中可以將與其能夠發生作用的蛋白“下拉”下來,進而利用蛋膠、Western Blot或者質譜鑒定拉下來的蛋白質,這些蛋白即與目標蛋白相互作用的蛋白。蛋白Pull down實驗還可以通過外源同時表達目標蛋白和待測蛋白,利用Pull down點對點的確定它們是否發生直接的相互作用,也可以僅表達蛋白質的結合區域進行蛋白Pull down,確定兩個蛋白結合的結構域。

      本公司主要提供Halo/GST-tag pull down:Halo-tag pull down是使用體外真核表達系統來表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶Halo標簽;GST-tag pull down是使用大腸桿菌誘導表達目的蛋白,表達的目的蛋白攜帶GST標簽,也可以利用其它標簽蛋白進行pull down實驗。

      Halo/FLAG-tag pull down技術優勢:

      真核表達系統,蛋白更接近體內結構

      沒有細胞內干擾因素的限制,表達成功率高

      蛋白表達載體構建成功后,不需要轉化和鑒定,可直接表達目的蛋白,節省時間

      步驟 內容 交付內容 周期
      載體構建
      • 客戶提供目的蛋白對應的CDS的序列或質粒,

      • 克隆至合適的表達載體,

      • 質粒測序,

      • 質粒制備。

      測序結果 1-2周
      無細胞表達+純化
      • 用小麥芽胚蛋白表達體系進行蛋白表達,

      • 蛋白表達評估 (Western Blot) 。

      表達評估報告 1周
      Pull Down
      • 細胞裂解,

      • 目的蛋白和總蛋白孵育,

      • 洗脫與目的蛋白結合的蛋白。

      銀染結果 1周
      質譜檢測
      • 將洗脫的蛋白進行質譜鑒定。

      質譜結果 2周

       

      客戶提供材料 交付結果

      新鮮樣本(組織或者細胞):細胞數量>2.7ⅹ107

      組織樣本>3g

      載體測序結果

      實驗過程圖

      質譜結果

      蛋白Pull Down 技術流程

       

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      蛋白Pull Down結果示例

      結果.pngGO結果.pngKEGG結果.png

      蛋白Pull Down應用案例

      2023年12月,北京林業大學和藍景科信合作,在植物學主流學術期刊Plant Stress(IF=5.0)上,發表了題為“Populus euphratica CPK21 interacts with heavy metal stress-associated proteins to mediate Cd tolerance in Arabidopsis”的研究成果。該研究借助HaloTag pull-down技術鑒定了胡楊CPK21的互作蛋白,為揭示胡楊CPK21調控植物Cd耐受的分子機制研究提供了技術支撐。

       

       

       

       

       

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